Cdc2基因敲低逆转录病毒载体设计与构建方法

摘要

目的设计和构建cdc2基因敲低的表达siRNA的逆转录病毒重组载体.方法利用在线软件siRNA Selection Program和siDirect设计干扰cdc2基因靶序列,合成回文DNA序列,退火后克隆至线性化pSUPER质粒载体,重组质粒载体扩增、抽提后行双酶切电泳鉴定和测序分析,再转染phoenix细胞,产生逆转录病毒,并利用NIH3T3细胞测定病毒滴度.结果pSUPER表达siRNA重组质粒载体经双酶切电泳鉴定和DNA测序分析,证实插入的60 bp序列与原序列一致,位置正确.pSUPER.retro-C1、pSUPER.retro-C2病毒滴度值分别为4.25×105CFU/m1和6.00×105CFU/ml.结论cdc2基因表达siRNA逆转录病毒重组载体构建成功,可为研究胶质瘤分子病因学提供有用工具.