人乙酰胆碱受体α-亚基在大肠杆菌中的表达

摘要

目的 通过将乙酰胆碱受体(AchR) α-亚基与分子伴侣蛋白(Chaperonin)共表达,减少包涵体含量,提高可溶性目的蛋白含量.方法 将乙酰胆碱受体α-亚基结构域基因的重组质粒pPR506与含分子伴侣蛋白GroESL基因的重组质粒pGE60一起转入E.coli DH5α,并在IPTG诱导下共表达.结果 由于分子伴侣蛋白具有协助重组蛋白再折叠的功能,其共表达产物与仅含pPR506的工程菌单一表达产物相比,前者增加了以非包涵体形式的表达.产物经SDS-PAGE、免疫印迹试验与FPLC分离等分析,均表明该工程菌的共表达产物为AchR α-亚基结构域(相对分子质量为13×103)及其与GroES的络合物(23×103).结论 分子伴侣蛋白帮助了重组蛋白在菌体内的正确折叠,提高了目的蛋白的可溶性.