大肠杆菌热敏感毒素突变体及其亚基的高效表达方法

摘要

本发明提供了一种LT突变体及其亚基的高效表达方法，并提供了应用方法，大肠杆菌热敏感毒素(heat-labile toxin，LT)是目前世界上公认的免疫效果最好的粘膜免疫佐剂之一，但其有一定毒性且难于大量获得，严重的阻碍了其在人和动物疫苗中的应用。本发明采用大肠杆菌作为表达宿主制备LT的过程中，LT在大肠杆菌中的表达量非常的低，只有1-5％。本发明在实验保存的已经去毒的大肠杆菌毒素基因LTm(R192G)的基础上，采用基因工程手段构建了一系列的LT突变体及其A、B亚基原核表达质粒，并进行了表达优化、纯化、活性检测，能构建了8株表达重组菌。经Western Blotting检测发现所表达的目的蛋白均具有免疫原活性。使LTAm和CBD-LTB的表达量分别达到了35％和30％。再经历一系列方法最终可得到纯度95％以上的蛋白。