抗VEGF165的嵌合抗体在小鼠骨髓瘤细胞中的表达

摘要

目的 减少鼠源性单抗的免疫原性,获得抗人血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165, VEGF165)的人/鼠嵌合抗体.方法 将抗VEGF165鼠单抗VmD11的轻链可变区基因VL和重链可变区基因VH分别克隆到带有人IgG1轻链恒定区基因Cκ,重链恒定区基因Cγ1的真核表达载体pAcyc-neo-Cκ和psv2-gpt-Cγ1上,构建了真核表达载体pAcyc-neo-Cκ/hu和psv2-gpt-Cγ1/hu,并应用脂质体转染的方法将其共同导入小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0中进行表达.结果 转染后通过筛选培养获得了7个抗性细胞克隆,经亚克隆化培养得到4个稳定表达的阳性细胞株,ELISA检测到抗VEGF165人/鼠嵌合抗体表达,RT-PCR也证实了该嵌合抗体在mRNA水平上的表达.培养上清液中的抗体表达量约为10μg/L,腹水中约为100μg/L,经竞争ELISA实验和Western blot实验证实其具有与亲本鼠源单抗相同的VEGF165结合特性.结论 成功的构建了能与VEGF165结合的人/鼠嵌合抗体.