γδT细胞杀肿瘤细胞过程中溶酶体运动及肌动蛋白纤维、T细胞受体重排特征研究

摘要

目的 观察γδT细胞溶解肿瘤靶细胞过程中溶酶体运动特征,了解T细胞受体、肌动蛋白纤维在效应/靶细胞接触区域的分布特征,探讨γδT细胞抗肿瘤生物学活性的可能机理.方法 Lysotracker Red-DND99标记的γδT细胞与人恶性黑色素瘤MeWo细胞共同培养,激光共聚焦显微镜实时观察γδT细胞杀伤肿瘤细胞过程中溶酶体运动过程及其特点.γδT细胞与MeWo细胞共同培养后甲醛固定,以rhodamine phalloidin标记肌动蛋白纤维或anti-TCRδ1-FITC抗体标记T细胞受体,激光共聚焦显微镜观察γδT细胞及肿瘤细胞之间免疫突触形成特征.结果 γδT细胞可快速识别并集聚于肿瘤细胞周围.在与肿瘤细胞直接接触的10 min内,将胞内溶酶体成分"倾吐"于肿瘤细胞后随之离开.肿瘤细胞受大量γδT细胞攻击后约60 min,出现细胞膜皱缩、变圆,约80 min死亡.在上述效应/靶细胞接触作用过程中,肌动蛋白纤维及T细胞受体均匀分布于γδT表面,不出现在效应/靶细胞接触区域富集现象.结论 γδT细胞通过与肿瘤细胞直接接触,释放其细胞内溶酶体内含物直接杀伤肿瘤细胞.与细胞毒性T淋巴细胞不同,γδT细胞与肿瘤细胞之间不形成典型的免疫突触.