HTLV-1 Tax蛋白对T细胞中HMGB1调控的影响

摘要

目的探讨人T淋巴细胞白血病1型病毒（human T-cell leukemia virus 1,HTLV-1）Tax蛋白对人高迁移率族蛋白1（high mobility group box 1,HMGB1）基因转录调控的影响。方法提取TaxN和TaxP细胞总RNA和蛋白质,通过real-time PCR和Western blot分析HMGB1 mRNA和蛋白质的表达情况;利用脂质体介导方法 ,将6个含有不同长度HMGB1调控序列的pGL3-HMGB1-luc瞬时转染至TaxN和TaxP细胞,观察HMGB1基因在不同T细胞中的转录活性;pCMV-Tax与pGL3-HMGB1-luc瞬时共转染至Jurkat细胞,观察Tax蛋白对HMGB1基因的转录调控影响;染色体免疫共沉淀（ChIP）找寻Tax蛋白影响HMGB1基因转录调控的区段。结果 TaxP细胞中HMGB1 mRNA和蛋白质表达水平高于TaxN细胞。TaxN和TaxP细胞中HMGB1调控趋势基本相似,均表现出3号质粒（pHLuc3,含有-504～+83 HMGB1区段）的相对荧光素酶活性（HMGB1/neo）最高,但是6号质粒（含有-1163～+83 HMGB1区段）却表现出TaxP细胞HMGB1的转录活性明显高于TaxN细胞。pCMV-Tax与pGL3-HMGB1-Luc报告基因共转染到Jurkat细胞也显示,6号质粒（pHLuc6）中Tax促进HMGB1基因的转录。ChIP分析证实了Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段。结论 -504～-383可能是HMGB1基因转录激活的关键启动子区,Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段促进HMGB1基因转录。