1型登革病毒抗原表位嵌合人3型腺病毒六邻体重组病毒的构建及免疫学鉴定

摘要

目的构建六邻体嵌入1型登革病毒（DENV1）抗原表位的人3型重组腺病毒,鉴定其抗原性。方法以人3型腺病毒骨架质粒pBRAd△E3GFP为模板,overlap PCR在六邻体高变区HVR1插入DENV1的抗原表位,突变的六邻体片段克隆到穿梭载体,酶切后与线性化的3型腺病毒骨架质粒pBRAdAE3GFP在大肠杆菌BJ5183同源重组,获得阳性重组腺病毒质粒pBRAd△E3GFPDENV1。线性化后转染AD293细胞拯救重组腺病毒rAd△E3GFP-DENV1并大量培养。纯化后腺病毒免疫BALB/c小鼠,通过ELISA和Western blot检测小鼠的体液免疫应答。结果在人3型腺病毒六邻体成功插入DENV1抗原表位并包装出重组腺病毒,ELISA和Western blot结果显示小鼠免疫后能产生血清识别DENV1。结论成功构建六邻体HVR1嵌入DENV1抗原表位的重组腺病毒,为多价登革病毒疫苗的研究奠定了基础。