痢疾杆菌增进侵袭性染色体调节基因criA的分子克隆及遗传学分析

摘要

目的为证实调控ｉｐａＢＣＤ表达除侵袭质粒上的两个正性调控基因ｖｉｒＦ和ｉｎｖＥ外，染色体上也可能存在与ｉｎｖＥ共同参与促进ｉｐａ基因表达的因子。方法应用低拷贝克隆载体ｐＡ－ＣＹＣ１８４，在大肠杆菌构建福氏志贺氏菌染色体基因文库。经半乳糖苷酶活性测定、分子杂交等筛选，获得一株能增进上皮细胞侵袭性基因ｉｐａＢ表达的ＤＮＡ分子克隆ｐＱ４４５。结果该片段约为４．３ｋｂ长，ＤＮＡ序列分析表明有两个完整的开放阅读框架（ＯＲＦ），经插入缺失突变发现，其中一个ＯＲＦ的表达产物能增加ｉｐａＢ的活性，为ｉｐａ正性调节因子，定名为ｃｒｉＡ。ｃｒｉＡ基因位于细菌染色体８７．３分处，志贺菌属大多菌群都携带该基因。ｃｒｉＡ约１４３８ｂｐ，编码４７６个氨基酸残基的酸性蛋白，分子量约５２６００。结论ＣｒｉＡ蛋白可能凭借其２６８～２９８位和３２０～３４１位两处的氨基酸残基位点亮氨酸拉链区结构，在蛋白相互作用中调节侵袭性基因的表达