虫媒病毒性脑炎M-RT-PCR诊断方法的建立及应用

摘要

目的 建立常见嗜神经性虫媒病毒 （arboviruses）分子生物学诊断方法及分子流行病学调查模型。方法 通过生物信息学方法筛选 3对常见嗜神经性虫媒病毒特异基因扩增引物 ,建立多重逆转录聚合酶链式反应 （multiplexreversetranscription PCR ,M RT PCR）体系。考察了体系的特异性、敏感性和广谱性并使用建立的M RT PCR体系对我国新分离的 3株病毒进行鉴定。结果 M RT PCR体系针对黄病毒及甲病毒敏感性达到 10 0PFU ,针对加利福尼亚脑炎病毒组达到 10 0 0PFU。利用M RT PCR体系证实 3株新分离嗜神经性虫媒病毒株中 2株为蜱传脑炎病毒远东型 ,另 1株为日本脑炎病毒Ⅰ型。结论 建立了针对嗜神经性虫媒病毒的分子生物学鉴定方法 ,该方法能够准确分析黄病毒属嗜神经性虫媒病毒 （日本脑炎病毒、蜱传脑炎病毒和西尼罗病毒 ）的基因型、地理来源、进化及亲缘关系等 ,能够鉴定并区分甲病毒属不同病毒 （东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒和委内瑞拉马脑炎病毒 ） ,能够鉴定加利福尼亚脑炎病毒组病毒