冰冻组织特定区域的RNA快速提取及其RT-PCR分析

摘要

目的:为减少RNA提取过程中不同细胞和组织间的交叉污染,提高逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)结果的特异性和可靠性.方法:建立冰冻组织特定区域的RNA快速提取及RT-PCR检测技术.首先,制备5μm和20μm的连续冰冻切片,前者用于常规组织学染色和针对靶基因产物的免疫组织化学染色.依观察结果,在20μm的切片上,分离某一特定区域做快速RNA提取和RT-PCR分析.结果:该方法能在1小时内完成微量组织的RNA提取,并在6小时内获得RT-PCR结果.与常规RNA提取法比较,可有效排除因细胞间污染所致的假阴性或假阳性结果.结论:该方法适用于在多种类型组织混杂的标本内检测某一特定细胞群体和各群体间的基因表达以及表达差异,是对现有RNA提取和RT-PCR检测技术的重要补充.