鸡LIF基因mRNA组织表达RT-PCR半定量测定分析

摘要

选取饲养环境条件一致的海兰褐蛋鸡10只，在240日龄时分别采集心、肝、脾、肺、肾、卵巢、输卵管、脑组织和胸腺，迅速收集并置于液氮中冷冻，-80℃保存样品待用。所采组织样用Trizol法提取总RNA，经琼脂糖凝胶电泳检测，并测定浓度，-80℃保存以备反转录。按照试剂盒说明书提供步骤进行RNA反转录，合成DNA。根据NCBIGenBank中已收录的鸡LIF基因DNA序列(NCBI Reference Seguence:NC-006102.3)设计一对特异引物:上游引物5'-GGTGAGGATTGGGCAGAAAC-3'、下游引物5'-CAACCCTACACGGGACAGATT-3';以GAPDH基因为内标，上游引物:5'-ATGGCATCCAAGGAGTGA-3'、下游引物:5'-GGGAGACAGAAGGGAACAG-3' ,用半定量RT-PCR检测LIF基因在海兰褐鸡9种不同组织的mRNA表达水平差异。通过ImageJ2x软件分析RT-PCR产物灰度值，各组织mRNA的相对表达量用每个样品mRNA的表达量与内参基因GAPDH mRNA的表达量的比值表示。结果表明，扩增获得了鸡LIF基因片段长度为496 bp,GAPDH基因扩增片段长度为141bp。海兰褐蛋鸡在240日龄时的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、输卵管、脑和胸腺组织中均有表达。相对表达量依次是0.0609、0.0537、1.5483、0.8186、0.3067、0.1025 、0.4275、0.6163、0.2827。其中，在脾脏中的LIFmRNA表达水平最高，其次是肺脏，在心、肝脏、卵巢组织中的mRNA表达水平相对较低。此表明，鸡LIF基因mRNA在体内组织分布较广、表达水平不均匀。