小鼠p35nck5a基因5′侧翼非编码区基因表达调控作用研究

摘要

目的　探讨决定Alzheimer's病(AD)的相关基因p35nck5a神经特异性表达的分子机理。方法 通过构建荧光素酶表达载体，利用原代培养神经细胞进行瞬时表达实验寻找指导神经特异性表达的顺式作用元件，并通过引物延伸实验寻找转录起始位点，通过染色质DNase 1高敏位点(DNase 1 hypersensitive site, DHSS)实验确定与p35nck5a转录相关的DNase 1高敏位点。结果　瞬时表达实验结果显示在神经细胞和非神经细胞中，所构建的各载体的表达情况没有明显差异；在新生大鼠的脑组织和肝组织中存在染色质DNase 1高敏位点的差异，该位点大约位于脑基因组p35nck5a编码区上游-400 bp处。引物延伸实验结果显示主要的转录起始位点的位置与DNase1高敏位点的位置具有一致性，与瞬时表达实验结果也具有相关性。结论　以上结果提示在所克隆到的p35nck5a 5′侧翼序列中不存在决定该基因组织特异性表达的顺式作用元件，另外染色质水平上的某些调控机理可能对决定神经特异性表达具有重要意义。