亚硫酸氢钠测序检测单个人卵子印记基因甲基化状态方法的改进

摘要

目的 建立和改进采用亚硫酸氢钠测序检测单个人卵子印记基因甲基化状态的方法.方法 对超促排卵来源的人类单个卵子用低熔点琼脂糖包埋,亚硫酸氢钠处理后行PCR扩增,PCR产物克隆测序确定印记基H19和MEST的CpG位点的甲基化状态.结果 在改进了低熔点琼脂糖包埋和亚硫酸氢钠处理方法后,单个卵子的PCR成功率达到82.46%,体细胞污染率为7.14%.克隆测序结果显示,其序列符合理论序列,序列中未见非CpG的胞嘧啶.结论 单个卵子亚硫酸氢钠测序检测印记基因甲基化状态的方法具有高效、稳定的特点,可以为进一步研究人类辅助生殖技术对基因印记的影响提供基础.