应用抑制性消减杂交方法构建斑秃毛乳头差异表达基因文库

摘要

目的构建斑秃区与正常毛囊毛乳头细胞(DPC)差异表达的cDNA正向和反向消减杂交文库,为从中克隆鉴定出斑秃特异性表达和生长期DPC特异性表达的基因奠定基础.方法应用抑制性消减杂交技术,分别从斑秃区DPC及正常头皮DPC提取总mRNA;依次合成单链及双链cDNA,分别与2种不同的接头连接,再进行正向和反向的2次消减杂交及2次抑制性PCR;将产物与T/A载体连接构建cDNA消减文库.结果构建成功具有高消减效率的斑秃区及正常头皮DPC cDNA消减文库,文库扩增后得到120个阳性克隆,其中90个克隆含有100～500 bp插入片段.结论应用抑制性消减杂交技术所构建的斑秃区及正常头皮DPC cDNA消减文库,为进一步批量筛选、克隆斑秃区及正常头皮DPC特异性表达的基因奠定了基础.