人毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因cDNA文库的构建

摘要

目的　构建毛乳头细胞凝集性生长状态下差异表达基因的消减cDNA文库。方法　分别提取凝集性生长和非凝集性生长状态下毛乳头细胞中的总RNA ,应用SMARTcDNA合成技术和抑制性消减杂交技术分离毛乳头细胞凝集性生长状态下差异表达基因的cDNA片段并建立消减cDNA文库 ;利用PCR对随机挑选的 10 0个白色菌落进行插入片段的验证 ,对其中证实有插入片段的 3 0个克隆进行cDNA斑点杂交验证。结果　所构建的消减cDNA文库扩增后得到 3 2 0个阳性克隆 ,随机挑选的 10 0个阳性克隆中 95 %的均有长度在 10 0～ 60 0bp的插入片段 ,cDNA斑点杂交验证显示 2 7个( 90 0 % )克隆为阳性。结论　结合SMARTcDNA合成技术 ,应用抑制性消减杂交成功地构建了毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因消减cDNA文库 。