利用定点突变技术构建突变nm23-H1和EGFP融合基因

摘要

背景与目的以前的研究已经证明nm23-H1基因是肿瘤转移抑制基因,但其抑制肿瘤转移的分子机制目前还不完全清楚.基因定点突变技术可以精确地改变基因的特定碱基序列,获得突变蛋白质.本研究的目的是应用基因定点突变技术构建突变型nm23-H1-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因,为进一步研究肿瘤抑制基因nm23-H1的功能、生化作用机制提供理论基础和实验依据.方法以逆转录病毒PLXSN野生型nm23-H1-EGFP质粒为突变模板,应用QuikChangeTM定点突变方法,简单、快速、高效地引入nm23H1S44A、nm23-H1P96S、nm23-H1H118F、nm23 H1 S120G四个点突变和一个联合位点突变nm23-H1 P96S-S120G,构建了突变型nm23-H1-EGFP融合基因.结果成功构建了nm23-H1S44A-EGFP、nm23-H1P96S-EGFP、nm23-H1H118F-EGFP、nm23-H1S120G-EGFP、nm23-H1 P96S-S120G-EGFP五个突变型nm23-H1-EGFP融合基因,经DNA序列分析突变的碱基序列与实验设计完全一致.结论成功构建了五个具有不同突变位点的突变型nm23-H1-EGFP融合基因.QuikChangeTM定点突变技术是一种简单、快速、高效的基因定点突变方法.