人乳头瘤病毒PCR产物酶标-微孔板杂交分型

摘要

目的建立聚合酶链反应(PCR)产物直接酶标记微孔板反向分子杂交法用于人乳头瘤病毒(HPV)型别鉴定.方法利用HPV通用引物介导PCR(GP-PCR)扩增靶DNA,然后对产物直接标记辣根过氧化物酶复合物(HRP-PEI-QI),与预先包被在微孔板上的HPV寡核苷酸探针杂交后酶显色法检测.结果 HPV各型之间无交叉杂交;杂交灵敏度可达13～76个病毒DNA拷贝,比PCR-琼脂糖凝胶电泳检测高10倍;该法重复性好,阳性孔批内CV为6.34%,批间CV为10.53%,阴性孔批内CV为1%,批间CV为5.79%;而且杂交影响因素较少.结论该法特异性强、灵敏度高、操作简便,无放射性和E.B.染料污染,杂交时间短、仪器读取结果,便于大量常规临床样本定性或定量检测.