逆转录-PCR-变性梯度凝胶电泳法检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症

摘要

目的探讨逆转录-PCR-变性梯度凝胶电泳法（RT-PCR-DGGE）对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症（G6PD 缺乏症）进行分子诊断的可行性。方法以硝基四氮唑蓝（NBT）G6PD/6PGD 比值将患儿分为 G6PD 活性缺乏（60例）、不能确诊（51例）及 G6PD 活性正常值组（100例）;外周血提取总 RNA 和逆转录成 cDNA;针对中国人群已报道的17种突变位点,以 cDNA 为模板,分段设计6对DGGE 引物,利用 PCR-DGGE 等方法在全编码区范围内分区段进行基因突变筛查及分型,并对各类突变型进行测序验证。结果检出 A95G、G392T、T517C、G871A、C1024T、C1360T、G1376T、G1388A 8个已知基因突变位点和1个新发现位点,G6PD 缺乏组、不能确诊组及 G6PD 活性正常值组基因突变总检出率分别为88.3%、77.3%和14.0%。结论 RT-PCR-DGGE 对 G6PD 缺乏组、不能确诊组的基因突变检出率较高,特别是对不能确诊组杂合子检出具有重要临床意义。