含内质控的新型检测HIV-1感染的双特异性探针实时荧光RT-PCR方法的建立

摘要

目的 以包含内标RNA的病毒样颗粒作为内质控,建立一种新型的检测HIV-1感染的包含双特异探针实时荧光RT-PCR方法(Dual-specificity probe real-time reverse transcriptase-PCR,DSPrtRT-PCR),提高HIV-1RNA的检出率.方法 采用针对HIV-1基因组保守区域内两个不同区域的两条不同的荧光探针和两组引物,建立检测HIV-1RNA的实时荧光RT-PCR方法,并构建了内含HIV-1内标RNA的病毒样颗粒,将其作为本方法的内部假阴性质控,考察了所建立方法的检测灵敏度和特异性.比较了单探针和双探针检测方法在HIV-1亚型检测能力、检测灵敏度和临床样本的检测适用性.结果 所建立方法的灵敏度为125 U/ml;在检测HIV-1阴性样本时具有100%的特异性.和单探针方法比较,双特异探针方法在HIV-1亚型检测中能检测到M族的所有亚型以及O族;检测灵敏度和单探针方法比较无统计学意义;在对60份临床样本的检测中,单探针方法只能检出39份,而双探针方法能检出50份(10份检测阴性的样本用COBAS检测证明为阴性).结论 本研究建立的HIV-1 RNA的DSPrtRT-PCR具有很高的检测灵敏度以及HIV-1多亚型的检测能力.在对临床样本的检测中证明具有很好的临床适用性.