荧光定量PCR检测Rh阴性孕妇外周血浆游离DNA中胎儿RhD血型

摘要

目的探讨荧光定量 PCR（fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR）技术对 Rh 阴性孕妇血浆中游离胎儿 DNA 进行非创性产前诊断胎儿 RhD 血型的可行性。方法选取78份妊娠11～40周、B 超确诊为单胎的 Rh 阴性孕妇血浆。采用9个短串联重复序列（shorttandem repeat,STR）多态性位点及 Y 染色体性别决定区基因（sex-determining region Y chromosome,SRY）确定胎儿 DNA 的存在;运用 FQ-PCR 技术对血浆中游离胎儿 DNA 进行 RHD 基因外显子5、7、10和内含子4定量分析,以确定胎儿 RhD 血型的基因型;其基因型结果与产后新生儿脐血血清学检测结果进行对比分析,回顾性评价胎儿基因定型结果的准确性。结果 78份标本中,41份检测到SRY 基因,平均浓度为（214.7±120.9）拷贝/ml,产后证实皆为男性。70份 FQ-PCR 基因定型结果与血清学结果相符,另有5份确定为假阳性,3份基因定型结果不可确定,检测结果总符合率为90%（70/78）。5份假阳性标本通过检测 RHD1227A 等位基因鉴定了4份 RhD 放散型,FQ-PCR 最终结果准确率达到95%（74/78）。结论应用 FQ-PCR 方法进行非创性胎儿 RhD 血型检测可用于新生儿溶血病的预防和诊断。