巢式多重等位基因特异性PCR直接检测痰标本结核分枝杆菌耐药性临床应用研究

摘要

目的应用巢式多重等位基因特异性扩增（nMAS-PCR）检测体系,同步检测结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA基因突变,以快速筛查结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性。方法收集2012年7至8月广州市胸科医院临床疑似肺结核患者165例,留取涂阳晨痰标本,提取结核菌DNA,用nMAS-PCR法同时进行rpoB基因516、526、531位点、katG基因315位点和inhA基因--15位点的突变检测,初步判断对利福平与异烟肼的耐药性,并将检测结果与线性探针法比较,采用Kappa检验进行统计学分析。结果 165份涂阳痰标本中结核分枝杆菌148份,其中利福平敏感株121株,利福平耐药株27株;异烟肼敏感株115株,异烟肼耐药株33株。nMAS-PCR法结果显示利福平及异烟肼敏感株均未见突变,特异度均为100%,而利福平耐药株检测敏感度为78%（21/27）,稍低于线性探针法（82%,22/27）;异烟肼耐药株检测敏感度为82%（27/33）,与线性探针法结果一致（82%,27/33）;两种方法对异烟肼与利福平耐药性检测结果比较,Kappa值分别为0.94、0.75。结论 nMAS-PCR法具有较高的敏感度与特异度,简便经济,能够直接利用结核涂阳痰标本快速筛查多药耐药结核。