等位基因特异性多重PCR和DNA测序技术快速检测二线抗结核药耐药性的研究

摘要

目的：评价等位基因特异性多重PCR(MAS-PCR)检测二线抗结核药耐药性的可行性,初步明确江西地区耐二线抗结核药相关基因突变的特征.方法：采用MAS-PCR技术和DNA测序方法,对江西地区耐二线抗结核药的结核分枝杆菌42株和敏感菌20株进行耐药相关基因突变位点检测,同时以比例法为参照.结果：DNA测序分析:39株耐氧氟沙星(OFX)菌株中,32株存在gyrA基因错义突变,其中27株为94位密码子突变；只有2株发生gyrB基因点突变.19株耐卡那霉素(KAN)或卷曲霉素(CAP)菌株中,14株为rrs1401位点A→G突变,1株为rrs1402位点C→T突变.与比例法比较,MAS-PCR分别检测出61.5％的OFX耐药株、78.9％的KAN或CAP耐药株和56.3％的泛耐药临床分离株.结论：gyrA基因突变是江西地区结核分枝杆菌OFX耐药的主要机制,94位密码子突变最常见.rrs A1401G突变则是该地区KAN或CAP耐药的主要原因.在结核病高发和耐药形势严峻的地区,MAS-PCR方法对于快速检测二线抗结核药的耐药性、指导合理用药有一定的临床应用价值.