刚地弓形虫RH株主要表面抗原1的基因克隆及原核表达

摘要

目的 从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增出其主要表面抗原 1（SAG1）全长的基因编码序列 ,构建重组原核表达载体并在大肠埃希菌中进行表达 ,为进一步研制弓形虫病免疫诊断试剂盒打下基础。方法 根据弓形虫RH株主要表面抗原SAG1的cDNA序列设计一对引物 ,利用聚合酶链反应 （PCR ）技术从RH株弓形虫基因组中扩增出SAG1的全长基因 ,将其克隆到载体pGEX 4T 3中 ,并通过基因测序加以证实 ;重新设计引物将其亚克隆至原核表达载体pET 3 2c中 ,在大肠埃希菌中经IPTG诱导表达。结果 从刚地弓形虫RH株基因组中成功扩增到 10 3 0bp的全长SAG1基因 ,该基因在原核系统中经诱导表达出一分子量约 3 70 0 0大小的融合蛋白 ,表达产物以包涵体的形式存在。结论 SAG1是弓形虫主要的表面抗原 ,原核表达的SAG1融合蛋白在弓形虫病的免疫诊断中具有明显的潜在应用价值