活血解毒方调控AKT/mTOR通路抑制心肌凋亡改善大鼠缺血再灌注损伤的作用机制

摘要

目的 观察活血解毒方对缺血再灌注(I/R)损伤心肌的保护作用,探讨其调控蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)信号通路及凋亡相关蛋白表达以改善I/R损伤的作用机制.方法 将36只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、I/R组、活血解毒方低剂量组、活血解毒方中剂量组、活血解毒方高剂量组和阿司匹林组,每组6只.活血解毒方低剂量组、活血解毒方中剂量组、活血解毒方高剂量组分别给予活血解毒方0.27 g/kg、0.54 g/kg、1.08 g/kg灌胃,阿司匹林组给予阿司匹林0.03 g/kg灌胃,Sham组和I/R组给予等体积生理盐水灌胃.各组均灌胃2周后,行冠状动脉前降支结扎-松解手术,除Sham组外其余各组大鼠结扎冠状动脉左前降支90 min后,再灌注2 h,构建心肌I/R模型.检测各组大鼠血清心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白T(cTnT)表达水平;采用氯化硝基四氮唑蓝(N-BT)染色法检测心肌梗死面积,采用免疫印迹法检测磷酸化AKT(p-AKT)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Cleaved半胱天冬酶3(Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、p-p65凋亡相关蛋白的表达.采用实时荧光定量-聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测Bcl-2 mRNA表达.结果 与Sham组比较,I/R组CK-MB、cTnT、心肌梗死面积比增加(P<0.05),p-AKT、p-mTOR、Bcl-2蛋白表达均降低,Cleaved Caspase-3、β-catenin、p-p65蛋白表达均增加,Bcl-2 mRNA表达降低(P<0.05);与I/R组比较,活血解毒方低剂量组、活血解毒方中剂量组、活血解毒方高剂量组和阿司匹林组CK-MB、cTnT、心肌梗死面积比减少(P<0.05),p-AKT、p-mTOR、Bcl-2表达增加,Cleaved Caspase-3、β-catenin、p-p65表达降低,Bcl-2 mRNA表达增加(P<0.05).结论 活血解毒方预处理可降低心肌损伤标志物CK-MB和cTnT,减少心肌梗死面积,发挥心肌保护作用,激活AKT/mTOR通路并抑制心肌凋亡可能是其抗I/R所致心肌损伤的作用机制.