芸香苷通过抑制miR-377表达降低高糖诱导的小鼠足细胞损伤

摘要

目的:探讨芸香苷(Ru)对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及作用机制.方法:以小鼠足细胞MPC5为研究对象,分为正常对照组(NG组)、高糖组(HG组,30 mmol/L葡萄糖诱导MPC5细胞)、低剂量Ru干预组(HG+Ru-L组,25μmol/L Ru作用于高糖诱导的MPC5细胞)、中剂量Ru干预组(HG+Ru-M组,50μmol/L Ru作用于高糖诱导的MPC5细胞)、高剂量Ru干预组(HG+Ru-H组,100μmol/L Ru作用于高糖诱导的MPC5细胞)、高剂量Ru与miR-377过表达干预组(HG+Ru+miR-377组,100μmol/L Ru作用于高糖诱导的转染miR-377模拟物的MPC5细胞)及高剂量Ru与miR-377过表达对照干预组(HG+Ru+miR-NC组,100μmol/L Ru作用于高糖诱导的转染模拟对照序列的MPC5细胞),蛋白印迹(Western Blot)法检测各组细胞中nephrin、podocin、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,酶联免疫法检测各组细胞培养上清液中TNF-α和IL-6水平,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组miR-377水平.结果:(1)与NG组比较,HG组nephrin、podocin的蛋白水平降低(P<0.05);与HG组比较,HG+Ru-L组、HG+Ru-M组和HG+Ru-H组nephrin、podocin的蛋白水平升高(P<0.05);与HG+Ru+miR-NC组比较,HG+Ru+miR-377组nephrin、podocin的蛋白水平降低(P<0.05).(2)与NG组比较,HG组细胞抑制率[(75.15±7.66)％比(0.00±0.22)％]、凋亡率[(31.38±3.00)％比(7.73±0.69)％)]、Bax蛋白水平升高(P<0.05),Bcl-2水平降低(P<0.05);与HG组比较,HG+Ru-L组、HG+Ru-M组和HG+Ru-H组细胞抑制率[(51.36±5.42)％、(36.58±4.21)％或(22.55±2.36)％比(75.15±7.66)％]、凋亡率[(25.89±2.57)％、(19.57±1.47)％或(11.43±1.19)％比(31.38±3.00)％]、Bax蛋白水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05);与HG+Ru+miR-NC组比较,HG+Ru+miR-377组细胞抑制率[(60.11±5.89)％比(20.13±2.65)％]、凋亡率[(26.99±2.07)％比(11.70±1.15)％]、Bax蛋白水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05).(3)与NG组比较,HG组TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05);与HG组比较,HG+Ru-L组、HG+Ru-M组和HG+Ru-H组TNF-α和IL-6水平降低(P<0.05);与HG+Ru+miR-NC组比较,HG+Ru+miR-377组TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05).结论:Ru可能通过抑制miR-377表达降低高糖诱导的小鼠足细胞MPC5炎症反应和凋亡,从而保护足细胞损伤.