miR-15b-5p靶向SGK1对高糖诱导小鼠足细胞损伤的影响

摘要

目的 探讨非编码小RNA-15b-5p(miR-15b-5p)是否通过靶向调控血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶(SGK)1从而影响高糖诱导小鼠足细胞损伤.方法 以小鼠肾脏足细胞(MPC5)为研究对象,建立足细胞损伤模型,分为正常对照(NG,含5 mmol/L的D-葡萄糖)组和高糖刺激(HG,含30 mmol/L的D-葡萄糖)组.实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测足细胞中miR-15b-5p和SGK1 mRNA表达;运用生物学信息预测miR-15b-5p靶基因,双荧光素酶报告基因进一步验证;Western印迹检测过表达miR-524-5p或抑制SGK1表达对HG诱导足细胞损伤及凋亡相关蛋白的影响,流式细胞术检测细胞凋亡.共转染pcDNA-SGK1和miR-15b-5p模拟物,观察过表达SGK1对过表达miR-15b-5p作用于高糖刺激足细胞损伤时的影响.结果 与正常对照组相比,miR-15b-5p在高糖诱导的足细胞中表达下调(P<0.05),SGK1 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05).SGK1是miR-15b-5p的靶基因.miR-15b-5p过表达降低HG刺激的MPC5细胞凋亡率,促进B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、synaptopodin蛋白表达,抑制Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)-3和结蛋白(desmin)蛋白表达,差异均达到显著水平(P<0.05),与抑制SGK1表达作用结果相同.SGK1过表达可以逆转miR-15b-5p过表达对高糖刺激足细胞凋亡的抑制作用及对细胞损伤的保护作用.结论 miR-15b-5p通过靶向调控SGK1保护高糖刺激的足细胞损伤,抑制细胞凋亡.