MG132对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞ERK1/2、结缔组织生长因子表达的影响

摘要

目的:观察在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下,泛素蛋白酶体途径(ubiquitin proteasome pathway,UPP)对大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达的影响,并以蛋白酶体抑制剂MG132为阻断剂,探讨该途径在腹膜纤维化中的作用.方法:胰蛋白酶消化法原代和传代培养RPMC,经鉴定后第2代用于实验.按数字随机表法分为:(1)正常对照组;(2)LPS组:不同浓度LPS(1、10、100 μg/ml)作用24 h,10 μg/ml LPS分别作用于RPMC 0 h、12 h、24 h、48 h;(3)药物组:MG132 0.5,1,2 μmol/L预孵30 min后加10 μg/ml LPS作用24 h.Western印迹测ERK1/2蛋白的表达.ELISA法检测细胞培养上清液中CTGF的含量.结果:与正常对照组相比,LPS可刺激RPMC p-ERK1/2蛋白的表达增高,24 h是表达高峰(P<0.01),48 h表达量降低,但仍高于正常组(P<0.01);t-ERK1/2各组表达差异无统计学意义.LPS诱导RPMC CTGF蛋白的表达增高,且呈现时间、剂量依赖性(P<0.05).MG132能显著降低LPS所致的腹膜间皮细胞p-ERK1/2、CTGF蛋白的表达(P<0.05).结论:MG132可降低由LPS诱导的腹膜间皮细胞p-ERK1/2、CTGF蛋白的表达,提示泛素蛋白酶体途径参与了腹膜间皮细胞的纤维化发展,阻断该途径有利于防治腹膜纤维化.