基于微小RNA-27a-3p/磷酸二酯酶3A探讨益气活血方对缺血性脑梗死小鼠微血管保护的分子机制

摘要

目的 观察益气活血方对缺血性脑梗死模型小鼠脑微血管的保护作用,并探讨其分子机制.方法 选择50只成年雄性SPF C57小鼠,按随机数字表法分为假手术组、永久性大脑中动脉闭塞(pMCAO)模型组和益气活血方高、中、低剂量组,每组10只.采用改良的线栓法复制pMCAO卒中模型;假手术组不进行栓线操作.术后假手术组、pMCAO模型组均给予相同体积的生理盐水;益气活血方(组成:黄芪40 g、人参15 g、丹参30 g、益母草20 g、茯苓25 g、葶苈子10 g,由河北中医学院中药制剂中心制备成颗粒剂)高、中、低剂量组分别按240、120、60 mg/kg剂量灌胃.观察各组小鼠脑组织微血管形态、脑梗死体积的变化、血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素-1(Ang-1)、内皮素-1(ET-1)含量以及微小RNA(miRNA)-27a-3p的mRNA与磷酸二酯酶3A(PDE3A)的mRNA和蛋白表达水平.结果 pMCAO模型组脑梗死体积较假手术组明显增大〔(60.25±12.05)％比(2.02±0.26)％,P<0.01〕;各给药组脑梗死体积均较pMCAO模型组明显减小,且以益气活血方高剂量组的减小程度较低剂量和中剂量组更显著〔(38.98±10.26)％比(50.26±11.44)％、(45.77±8.95)％〕.光镜下可见:假手术组脑血管排列规则,管腔血液充盈,血管周围红润;pMCAO模型组梗死区血管腔内红细胞呈线性排列,管周间隙加大并有严重水肿,半暗区血管周围出现炎性细胞浸润;益气活血方各剂量组脑微血管受损程度均较pMCAO组明显减轻.pMCAO模型组VEGF、Ang-1、ET-1含量及PDE3A的mRNA和蛋白表达水平均较假手术组明显升高〔VEGF(ng/L):6.44±1.26比1.44±0.59,Ang-1(ng/L):9.68±2.33比2.33±1.02,ET-1(ng/L):50.55±18.66比20.44±9.56,PDE3A mRNA(2-ΔΔCt):6.99±0.86比1.00±0.00,PDE3A蛋白(PDE3A/GAPDH):2.84±1.49比1.00±0.00,均P<0.01〕,miR-27a-3p mRNA表达较假手术组明显降低(2-ΔΔCt:0.36±0.06比1.00±0.00);益气活血方高、中、低剂量组VEGF、Ang-1、ET-1含量及PDE3A的mRNA和蛋白表达水平均较pMCAO模型组降低,miR-27a-3p mRNA表达较pMCAO模型组升高,并呈剂量依赖性,随药物剂量的增加上述指标的变化更显著〔VEGF(ng/L):3.12±0.69、4.55±1.56、5.06±0.64比6.44±1.26,Ang-1(ng/L):5.66±2.03、7.89±2.03、8.90±1.29比9.68±2.33,ET-1(ng/L):30.44±10.78、40.44±10.65、42.33±10.12比50.55±18.66,PDE3A mRNA(2-ΔΔCt):2.09±0.65、4.22±0.71、6.22±0.80比6.99±0.86,PDE3A蛋白(PDE3A/GAPDH):1.56±0.16、2.50±1.30、2.73±0.78比2.84±1.49,miR-27a-3p mRNA(2-ΔΔCt):0.80±0.08、0.65±0.12、0.43±0.09比0.36±0.06〕.结论 益气活血方能明显改善急性脑梗死小鼠脑功能和形态,其作用与改善急性脑梗死小鼠微血管结构和调节微血管再生环境,以及调控miRNA-27a-3p/PDE3A的表达有关.