拮抗高迁移率族蛋白B1对烫伤小鼠白细胞介素-35表达及T淋巴细胞免疫功能的影响

摘要

目的 观察特异性拮抗高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对烫伤小鼠白细胞介素-35(IL-35)表达及T淋巴细胞免疫功能的影响.方法 选择成年雄性BALB/c小鼠30只,按随机数字表法分为正常组、假伤组、烫伤组、Abox干预组,正常组6只,其余各组每组8只.将小鼠背部皮肤置于97℃恒温热水中6s造成约15％体表面积烫伤模型,Abox干预组小鼠烫伤后2h和12h腹腔注射HMGBl特异性拮抗剂Abox 300μg.烫伤后24 h处死小鼠,取心、肝、脾、肺等组织,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组织中HMGB1和IL-35含量;用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)分析IL-35亚基p35和EB病毒诱导基因3(EBI3)的mRNA表达水平;由脾脏提取单个核细胞检测HMGB1和IL-35分泌水平,分离脾脏淋巴细胞检测效应T细胞增殖活性及IL-2、γ-干扰素(IFN-γ)、IL-4分泌水平.结果 与烫伤组比较,Abox干预后,各器官HMGB1含量和脾脏单个核细胞HMGB1分泌水平显著降低[心脏(mg/g):65.78±4.42比110.49±11.19,肝脏(mg/g):50.90±3.72比117.77±8.10,脾脏(mg/g):83.34±3.90比149.84±11.93,肺脏(mg/g):125.15±8.75比236.20±17.51,脾脏单个核细胞(μg/L):34.57±0.69比73.66±19.03];各器官组织p35和EBI3的mRNA表达[相对定量(RQ)值]及IL-35蛋白水平均有不同程度下降[p35 mRNA(RQ值):心脏为0.91±0.62比19.74±18.05,肝脏为0.42±0.19比14.85±8.39,脾脏为1.99±1.12比21.94±6.90,肺脏为0.50±0.21比5.15±3.46;EBI3 mRNA(RQ值)心脏为0.63±0.61比74.25±15.19,肝脏为0.64±0.09比56.59±19.99,脾脏为1.24±0.48比32.72±3.34,肺脏为0.30±0.06比2.41±1.43;IL-35蛋白(μg/g:心脏为142.40±19.95比241.64±12.40,肝脏为272.68±14.90比409.76±21.60,脾脏为66.94±9.60比92.28±8.82,肺脏为235.88±15.65比193.50±27.06;均P＜0.05),脾脏T淋巴细胞增殖活性增强(A值:1.26±0.26比1.03±0.05)及IL-2分泌水平也显著升高(ng/L:153.48±26.64比101.77±34.55),IFN-γ/IL-4比值显著增加(7.44±1.70比0.33±0.07),差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 特异性拮抗HMGB1可显著下调烧伤小鼠重要组织IL-35表达水平,有效促进脾脏T细胞增殖及Thl功能极化,从而有助于改善严重烧伤后免疫抑制状态.