SV40LT抗原介导的人源性肝细胞系的构建

摘要

目的建立人源性肝细胞系,为生物人工肝和肝细胞移植等提供合适的细胞源.方法利用SV40LTag基因和真核表达载体pcDNA3.1(-)经脂质体转染至来源于25岁男性脑死亡者供肝的原代培养细胞,使其永生化,进一步鉴定其形态学特征和生物学功能.结果经G418 700～300μg/ml筛选,42 d后获一抗G418肝细胞系.该细胞系呈单层贴壁、上皮细胞样形态生长,体外培养可无限传代,具有分泌白蛋白(ALB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)的功能,超微结构观察发现,转染肝细胞具有原代培养肝细胞的大多数典型特征,如较大的细胞核、胞浆内含有丰富的糖原颗粒、大量的线粒体和粗面内质网等.经逆转录聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹检测,转染肝细胞的ALB mRNA阳性和细胞色素P450 2E1阳性.结论新建人源性肝细胞系与原代培养肝细胞具有类似的形态学特征和生物学功能.