呼吸道合胞病毒M2:81-95与热休克蛋白70L1融合蛋白的制备及其免疫原性

摘要

目的构建呼吸道合胞病毒（RSV）CTL表位M2:81-95与热休克蛋白（HSP）70L1融合蛋白的重组质粒,原核表达后初步研究其免疫原性。方法从SMMC7721细胞中克隆HSP70L1基因,PCR扩增M2:81-95基因片段,鉴定后构建质粒pET-HSP70L1-M2:81-95（pET-HSP70L1-M2）,经PCR和酶切鉴定,转化E.coli BL21（DE3）,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达HSP70L1-M2:81-95（HSP70L1-M2）,Ni-螯合亲合层析纯化,梯度透析复性。用该蛋白免疫10只BALB/c小鼠,ELISA检测IgG抗体及其亚型,噻唑蓝（MTT）法检测CTL杀伤活性。结果成功构建重组质粒pET-HSP70L1-M2,并在E.coli中表达重组蛋白HSP70L1-M2,该蛋白诱导RSV及表位特异性的CTL活性,还诱导蛋白抗原特异性的IgG,为4.87±0.35、IgG1为5.53±0.28、IgG2a为4.40±0.21,且IgG1/IgG2a（1.26）的比例平衡,与PBS对照组的IgG,为0.33±0.17、IgG1为0.51±0.21、IgG2a为0比较,差异有统计学意义（t=3.512,3.681,5.856;P＜0.05）。结论成功构建原核表达质粒pET-HSP70L1-M2,并表达纯化获得重组蛋白,免疫小鼠后诱导RSV及表位特异性的CTL活性和辅助性T淋巴细胞（Th）1/Th2混合型应答。