VIM-2型金属β内酰胺酶的序列分析、原核表达及纯化

摘要

目的 对铜绿假单胞菌所产blaVIM-2进行基因重组表达及纯化.方法 以产blaVIM-2铜绿假单胞菌总基因组DNA为模板,PCR扩增blaVIM-2,将其克隆入pUCm-T载体后测定该核苷酸序列,再将blaVIM-2克隆入表达载体pET-41b(+),然后在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,表达产物再过Ni-NTA柱纯化.结果 PCR扩增出大小为801 bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100%.此基因能在大肠埃希菌中大量表达,蛋白分子质量大约为56 000 u.结论 对VIM-2金属酶的成功表达及纯化为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定了基础.