同源重组构建表皮葡萄球菌纤维蛋白原结合基因缺失突变菌株

摘要

目的 构建表皮葡萄球菌(表葡菌)纤维蛋白原结合基因(fbe基因)缺失突变菌株,为fbe基因功能研究提供实验工具.方法 采用同源基因重组技术.构建质粒ΔpBT2(含fbe::ermB基因),将其电转化进入金葡菌RN4220,再次抽提后电转化进入fbe基因阳性表葡菌(HB)中.将含有质粒ΔpBT2的表葡菌HB在5 mg/L红霉素平板 42℃经多次传代,使质粒ΔpBT2裂解,fbe::ermB基因同源重组到表葡菌HB的染色体上,通过红霉素耐药、氯霉素敏感等特性筛选出含有fbe::ermB基因的新表葡菌HB-ermB.结果 经酶切鉴定后确认质粒ΔpBT2构建成功以及成功转导入金葡菌RN4220和表葡菌HB中,经PCR方法以及测序确认表葡菌HB的fbe基因缺失突变菌株HB-ermB构建成功.结论 采用同源重组的方法完成了表葡菌HB的fbe基因缺失突变菌株的构建.