单细胞凝胶电泳法分析指标及检测DNA交联的标准断裂剂的研究

摘要

目的 寻求单细胞凝胶电泳计算机成像与分析系统中的有效分析指标,为H2O2在1 ℃条件下作为检测DNA交联的标准DNA断裂剂提供依据. 方法 常规培养Vero细胞,消化后悬浮在PBS中,H2O2 染毒,分别在37 ℃和1 ℃条件下孵育1 h,常规单细胞凝胶电泳,专用软件分析其图像. 结果 H2O2的染毒浓度在2 500 μmol/L以下时,尾长、尾面积、尾矩和尾积分等指标均有剂量-效应关系(T=37 ℃时,r分别为0.680,0.725,0.796,0.798;T=1 ℃时, r分别为0.685,0.717,0.622,0.714,P均＜0.01).在H2O2浓度较高的另一实验中,当H2O2为2～7 μmol/L时,仅尾矩和尾积分间存在这种关系;H2O2 各剂量(20、100、500、2 500 μmol/L)在37 ℃时对DNA的损伤程度均明显高于1 ℃时. 两种条件下上述4个指标都存在剂量-效应关系. 结论由该系统得到的尾矩和尾积分所反映的DNA损伤信息更准确、更全面、适用范围更广,但尾长可用作较初步的研究;H 2O2在1 ℃条件下可以作为检测DNA交联的标准DNA断裂剂.