miR-369-3p靶向CTHRC1对宫颈癌细胞顺铂耐药性的影响

摘要

目的:探讨微小RNA-369-3p(miR-369-3p)是否通过靶向胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)影响宫颈癌细胞顺铂(DDP)耐药性.方法:体外培养人宫颈癌细胞HeLa,采用顺铂梯度暴露法构建顺铂耐药宫颈癌细胞株HeLa/DDP;实验分组:DDP+miR-NC组、DDP+miR-369-3p组、DDP+si-NC组、DDP+si-CTHRC1组、DDP+miR-369-3p+pcDNA组、DDP+miR-369-3p+pcDNA-CTHRC1组;采用MTT法检测细胞增殖抑制率及计算IC50值;qRT-PCR检测miR-369-3p、CTHRC1表达量;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证miR-369-3p、CTHRC1的靶向关系;Western blot检测CTHRC1、Cy-clinD1、MMP-2、MMP-9、p21表达.结果:与HeLa组比较,HeLa/DDP组细胞增殖抑制率、miR-369-3p的表达水平显著降低(P<0.05),IC50值、CTHRC1 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05);HeLa/DDP细胞转染miR-369-3p mimics或转染si-CTHRC1后,细胞增殖抑制率、p21蛋白水平显著升高(P<0.05),迁移细胞数、侵袭细胞数显著减少(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-369-3p可靶向结合CTHRC1;CTHRC1过表达可明显逆转miR-369-3p过表达对细胞增殖、迁移、侵袭及顺铂耐药性的作用.结论:miR-369-3p过表达可能通过下调CTHRC1表达抑制HeLa/DDP细胞增殖、迁移及侵袭从而逆转宫颈癌细胞顺铂耐药性.