SPACE肽修饰成纤维细胞生长因子21的制备及对小鼠皮肤瘢痕形成的抑制作用

摘要

目的:制备SPACE肽修饰的成纤维细胞生长因子21(FGF21-SPACE)并探讨其对小鼠皮肤瘢痕形成的抑制作用.方法:将SPACE肽融合表达于FGF21的羧基端,使用大肠杆菌表达系统获得FGF21-SPACE重组蛋白,并制备相应的卡波姆凝胶制剂,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与Western blot鉴定其分子量,对重组蛋白携带的组氨酸(His)标签进行免疫组织化学染色,以检测其透皮能力.皮下注射博来霉素诱导小鼠皮肤瘢痕模型,动物实验分为4组,即对照组、模型组、FGF21组、FGF21-SPACE组.HE与Masson染色检测形态学变化;免疫荧光染色检测CD31、TGF-β1表达;Western blot检测α-SMA、纤连蛋白、胶原蛋白Ⅰ的表达.结果:FGF21与FGF21-SPACE的理论分子量分别为25.54kD与26.61 kD,与SDS-PAGE及Western blot鉴定结果相一致.涂抹FGF21-SPACE凝胶的皮肤组织His染色强度明显强于FGF21凝胶,而空白凝胶则为阴性染色.与FGF21组相比较,FGF21-SPACE组的真皮厚度与纤维化程度降低,CD31表达升高,TGF-β1、α-SMA、纤连蛋白、胶原蛋白Ⅰ表达降低.结论:FGF21-SPACE重组蛋白具备较好的透皮能力,可以抑制皮肤瘢痕形成,促进血管生成,降低纤维化相关因子的表达,具有较好的应用前景.