基于TLR4/MyD88/TRIF通路探讨芪参合剂对耐药肺炎克雷伯菌脓毒症大鼠的固有免疫调节机制

摘要

目的:基于TLR4/MyD88/TRIF通路探讨芪参合剂对耐药肺炎克雷伯菌脓毒症大鼠的固有免疫调节机制.方法:将40只SD大鼠随机分成空白组、模型组、芪参合剂组及TAK242组,气管注射耐药肺炎克雷伯菌复制脓毒症大鼠模型,造模后6 h,空白组和模型组灌胃给予生理盐水,芪参合剂组灌胃给予芪参合剂,TAK242组腹腔注射给予TAK242,1次/d,干预3 d后收集标本,检测BALF炎症因子水平及血清生化指标.RT-PCR、Western blot及免疫组化方法观察芪参合剂对肺组织中TLR4、MyD88、TRIF、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达的影响,ELISA法观察芪参合剂对肺组织中TNF-α、IL-6、MIP-2、CXCL1水平的影响.结果:与空白组相比,模型组大鼠BALF中TNF-α、IL-6水平及血清生化指标明显升高(P<0.05),肺组织中TLR4、MyD88、TRIF、NF-κB p65 mRNA及蛋白水平明显升高(P<0.05),肺组织中炎症因子(TNF-α、IL-6、MIP-2、CXCL1)水平明显升高(P<0.05).芪参合剂和TAK242均可显著下调TLR4信号通路中TLR4、MyD88、TRIF、NF-κB p65 mRNA和蛋白水平(P<0.05),同时显著下调炎症因子(TNF-α、IL-6、MIP-2、CXCL1)水平(P<0.05).结论:芪参合剂和TAK242作用效果相似,均可显著下调TLR4信号通路中TLR4、MyD88、TRIF、NF-κB p65的蛋白水平和mRNA水平,减轻炎症因子释放,从分子生物学水平阐明了芪参合剂的固有免疫调节机制可能与抑制TLR4信号通路的过度活化有关.