miR-448靶向SIRT1对血管平滑肌细胞增殖、凋亡和运动能力的调节作用

摘要

目的:探讨miR-448靶向SIRT1对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、凋亡和运动能力的调节作用.方法:20只SD大鼠随机分为对照组和模型组,建立大鼠颈动脉损伤模型,造模成功后分离大鼠颈总动脉,分离培养大鼠原代VSMCs,RT-PCR和Western blot检测大鼠颈总动脉组织VSMCs miR-448和SIRT1表达.体外培养VSMCs分为miR-448 mimic组、miR-448 inhibitor组和对照组,分别转染miR-448 mimic和miR-448 inhibitor,测定各组细胞miR-448和SIRT1表达,采用荧光素酶实验验证靶向关系.体外培养VSMCs分为miR-448组、miR-SIRT1组、SIRT1组和对照组,将miR-448 mimic转染至miR-488组和miR-SIRT1组,SIRT1转染至miR-SIRT1组和SIRT1组,EDU法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测各组细胞Ki67、PCNA、Caspase-3、Caspase-9、MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果:动脉损伤组织VSMCs中miR-448表达明显高于对照组(P<0.05),SIRT1表达明显低于对照组(P<0.05);miR-448可靶向负调控SIRT1,增强细胞增殖活性(P<0.05),上调Ki67和PCNA表达(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05),下调Caspase-3和Caspase-9表达(P<0.05),提高细胞侵袭率和迁移率(P<0.05),上调MMP-2和MMP-9蛋白表达(P<0.05).结论:miR-448可靶向负调控SIRT1,促进VSMCs增殖、侵袭和迁移.