人内皮抑制素在酵母细胞中的表达及其促成纤维细胞有丝分裂活性

摘要

目的:利用酵母真核细胞表达系统表达出重组人内皮抑制素 (Endostatin),并对其促成纤维细胞有丝分裂活性进行研究.方法:采用逆转录-PCR技术自人肝组织获得人内皮抑制素的cDNA,将其克隆入真核表达载体pYEX4T -1,构建含人Endostatin的重组质粒(pYEXEndo);经全自动序列分析仪测序确证后,将此重组质粒转化入酵母细胞(DY150)中进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析及Western blot 鉴定.以MTT掺入法初步检测了重组人内皮抑制素对NIH3T3细胞的促有丝分裂活性.结果:经CuSO4诱导的含pYEXEndo的酵母细胞表达出重组人GST-Endostatin 的融合蛋白,此蛋白在凝胶上表现为一约45 kD的阳性区带,在Western blot实验中可被GST 特异性多克隆抗体识别.重组人 GST-Endostatin融合蛋白的粗提物在体外能刺激NIH3T3细胞增殖. 结论:人GST-Endostatin的融合蛋白在酵母表达系统中高水平表达, 并具有刺激成纤维细胞生长的生物学活性.