人血管内皮抑制素在毕赤酵母中的表达纯化及活性测定

摘要

血管内皮抑制素是胶原ⅩⅧ C-末端的一个片段,是有效的血管生成抑制因子。克隆了人血管内皮抑制素的基因,并用毕赤酵母进行表达,表达量为50．5 mg／L。发酵液上清经SP Sepharose Fast Flow凝胶一步层析,产物纯度达到98％以上,纯化收率达到95％以上。毕赤酵母分泌表达的人血管内皮抑制素具有免疫活性,能明显抑制鸡胚尿囊膜新生血管的生长,并且能特异性地抑制bFGF刺激的人微血管内皮细胞的迁移,达到抑制效果为50％时所需的蛋白浓度 (IC50)为0．4μg／ml。为应用人血管内皮抑制素治疗肿瘤奠定了初步实验基础。