一种简易的人艾滋病毒(HIV-1)载量测定方法的建立与初步评价

摘要

目的:建立一种简易的HIV-1感染者和艾滋病人血浆病毒载量测定的方法.方法:构建含保守的引物SK145/SK431扩增靶序列的重组质粒pSPgag737,重组质粒体外转录产物经系列稀释得到HIV-1定量测定的外参照,在同样条件下以引物SK145/SK431对外参照和待测样品进行RT-PCR扩增,用电泳图谱分析系统分析经EB染色的扩增产物电泳图谱,作出外参照的初始加入拷贝数与光强度的标准曲线,获得相应的回归方程,进而计算出待测样品的HIV-1病毒载量.结果:重组质粒pSPaga737经酶切和PCR鉴定,确认含有引物SK145/SK431的扩增靶序列,用重组质粒体外转录,得到了1～105copies的10倍系列稀释的外参照,外参照标准曲线有较好的线性关系(r=0.96).该方法的测定范围为5×102～5×107拷贝/ml血浆.对10个样品进行3次重复测定,平均变异系数较小(CV=20%).结论:所建立的HTV-1病毒载量定量测定方法,操作简单,价格便宜,特异性好,同时有较好的可重复性.