人血管抑制因子的原核表达、纯化及活性研究

摘要

目的:利用大肠杆菌表达系统表达人血管抑制因子,并利用镍金属螯合层析法进行纯化,探讨其抑制血管内皮细胞增殖的活性.方法:采用RT-PCR技术从人肝脏组织中获取人血管抑制因子的 cDNA,将其克隆至原核表达载体pQE30中进行IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE分析,并利用镍金属螯合层析法进行纯化.3H-TdR法检测纯化的血管抑制因子对血管内皮细胞增殖的抑制作用.结果:利用pQE30表达载体表达的含6个组氨酸尾的vasostatin蛋白,在SDS-PAGE上表现出一条约21 kD的阳性条带,经镍金属螯合层析纯化后的蛋白经肽指纹图谱分析鉴定为目的蛋白,在体外可抑制人脐静脉血管内皮细胞的增殖.结论:人血管抑制因子可在大肠杆菌中以包涵体形式高水平表达,并具有抑制血管内皮细胞增殖的活性.