人白细胞介素21在真核细胞中表达及其体外促T细胞增殖作用

摘要

目的:构建人细胞因子IL-21表达载体并在Hela细胞中稳定表达,分析rhIL-21体外促T细胞增殖作用.方法:以已构建的pMD-IL21为模板,PCR扩增成熟IL-21 cDNA的编码框序列并构建到真核表达载体pCDNA3.1/hismyc-B中.挑出阳性克隆进行扩增,脂质体转染入Hela细胞中并以G418加压筛选.有限稀释法、RT-PCR及Western blot筛选出稳定表达的细胞株.培养上清液经金属离子螯合层析分离纯化后,SDS-PAGE、Western blot鉴定.MTT法测定其与抗CD3单克隆抗体共刺激T细胞增殖活性.结果:SDS-PAGE、Western blot显示Mr为18 000的带有myc重组人IL-21融合蛋白(rhIL-21);并成功地获得hIL21稳定表达细胞株.rhIL-21融合蛋白具有与抗CD3抗体共刺激T细胞增殖作用.结论:获得具有生物学活性的rhIL-21细胞因子,为进一步研究其功能奠定基础.