骨髓间充质干细胞免疫调节机制的实验研究

摘要

目的:研究骨髓间充质干细胞(MSCs)上的吲哚胺2,3-过氧化酶(IDO)活性对异基因T淋巴细胞增殖的影响,进而探讨MSCs的免疫调节机制.方法:从人骨髓中分离培养MSCs,并通过其形态的均一性及流式细胞术检测表面标志以鉴定其纯度.经200 U/ml IFN-γ作用后的MSCs以RT-PCR和Western blot分别检测IDO mRNA和IDO蛋白表达.有或无1-甲基色氨酸(1-MT)存在下,分别以1×105、5×104、1×104、5×103个MSCs与5×105个外周血异基因T淋巴细胞(MSCs: T数量比为1: 5、1: 10、1: 50、1: 100)建立混合淋巴细胞培养体系(MLR),以单独培养T淋巴细胞为对照组,MTT法检测T淋巴细胞增殖率,反相高效液相色谱法检测各MLR体系上清中IDO活性.结果:IFN-γ作用后的MSCs出现IDO mRNA和IDO蛋白的表达.当MSCs为1×105、5×104、1×104(即MSCs: T为1: 5、1: 10、1: 50)时,与对照组比较,T淋巴细胞的增殖率显著降低,IDO活性显著升高;加入1-MT后,T淋巴细胞的增殖率及IDO活性均恢复.当MSCs为5×103(即MSCs: T为1: 100)时,与对照组比较,T淋巴细胞的增殖率轻度升高(P＞0.05),IDO活性无明显变化(P＞0.05).结论:MSCs通过IDO活性在体外发挥免疫抑制作用.