RNAi介导Caspase-3基因及其抑制LPS诱导肾脏上皮细胞凋亡的研究

摘要

目的:探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果.方法:构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-caspase-3 shRNA,用电穿孔法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的表达Caspase-3 shRNA 的细胞系.实验分为3组:①正常对照组:未转染的RK3E细胞;②阴性对照组:转染空载体pRNAT-U6.1的RK3E细胞系;③实验组:转染Caspase-3 shRNA的RK3E细胞系.经脂多糖(LPS)孵育12小时后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测mRNA的表达,以及各组Caspase-8蛋白的活性.结果:与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低(P<0.01),Caspase-3的mRNA水平和蛋白活性显著降低(P<0.01).结论:针对Caspase-3的特异性短发夹RNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的发生.