胚胎干细胞分化形成囊状胚胎小体的形态学变化特征

摘要

目的 观察胚胎干细胞R1(ESs)体外分化形成囊状胚胎小体(CEBs)及其血管内皮细胞和平滑肌细胞的时相规律和结构特点,探讨其在血管发育生物学研究中的作用和意义.方法 体外悬浮培养ESs形成CEBs,采用HE染色观察CEBs的结构特点.用免疫荧光染色鉴定不同培养时间的CEBs中CASPASE-3的表达.加入全反式维甲酸(atRA)及联丁酰基cAMP(DBcAMP)定向诱导ESs分化,其后行平滑肌特异性标志物α-肌动蛋白(SM α-actin)及内皮细胞特异性标志物PECAM-1免疫荧光染色.结果 典型的CEBs在第13d左右可以形成.第6d就可见CEBs中心部位出现调亡细胞,坏死腔开始形成,到第13d时中心坏死腔完全形成,凋亡细胞明显增多.将第6d的CEBs接种于培养皿后用atRA及DBcAMP处理,3d后可见SM α-actin染色阳性细胞.而未经处理的CEBs贴壁后,在第10d可见PECAM-1的表达.结论 CEBs能够模拟体内血管发生形成的过程,可作为研究血管发育生物学的较好模型.