小鼠成体肝脏前体细胞最佳培养条件探索

摘要

目的 建立一种专门用于小鼠肝脏前体细胞的培养条件,并鉴定该条件在连续传代培养的过程中是否能够维持前体细胞良好的生长状态,并减少分化的发生.方法 配制4种不同配方的培养基,在连续传代过程中通过观察细胞形态学变化而选择适用的配方,并经Western blot检测细胞内肝细胞标志物白蛋白(albumin,ALB)、肝脏前体细胞标志物甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)和胆管细胞标志物细胞角蛋白-19(cytokeratin-19,CK-19)表达量的变化,流式细胞术分析细胞周期,以及免疫荧光染色鉴定前体细胞标志物的表达以进一步验证选择配方的有效性.结果 使用第4种培养基进行培养时,细胞形状规则,边界清晰,生长活力较好,连续传代培养后细胞的形态未发生明显改变.Western blot检测显示,ALB、AFP和CK-19在P0代、P3代和P8代中的表达量没有显著改变.流式细胞术结果显示,经连续多次传代的细胞约76％的细胞处于G0/G1期,近24％的细胞处于S+G2/M期,而且约89％的细胞表达肝脏前体细胞标志物上皮细胞粘附分子(epithelial cell adhesionmolecule,EpCAM).免疫荧光染色进一步证实了大多数细胞表达EpCAM.结论 建立了合适的培养基配方可用于小鼠成体肝脏前体细胞的连续传代培养,为更加深入地研究肝脏前体细胞的机制与再生医学方面创造了前提条件.