细胞自噬在D-氨基半乳糖/脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭中的表达

摘要

目的利用D-氨基半乳糖/脂多糖（D-GalN/LPS）诱导的小鼠急性肝衰竭模型, 研究细胞自噬在肝衰竭疾病进展过程中的表达及其作用。方法以C57BL/6小鼠为研究对象, 腹腔注射D-GalN/LPS建立小鼠急性肝衰竭模型。动物实验分组:对照组、D-GalN/LPS诱导肝衰竭模型2 h组、D-GalN/LPS诱导肝衰竭模型4 h组和D-GalN/LPS诱导肝衰竭模型6 h组。检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）评价肝脏功能, 观察肝脏组织病理变化评价肝脏损伤情况, 实时荧光定量PCR检测自噬相关基因表达, Western blot测定小鼠肝组织中自噬相关蛋白表达, 荧光显微镜观察肝衰竭进展过程中自噬体的表达情况。多组样本均数的两两比较采用One-way ANOVA分析（方差齐者用LSD-t检验, 方差不齐者用Games-Howell法）, P ＆ 0.05为差异有统计学意义。结果急性肝衰竭模型组肝功能随着D-GalN/LPS刺激的进展逐渐受损:ALT、AST在4 h后显著增高, 肝脏组织病理损伤随时间逐渐加重, 6 h达到急性肝衰竭标准;自噬相关基因ATG-7、ATG-5、Beclin-1、Lamp-1和LC3a mRNA和蛋白在急性肝损伤早中期（2 h和4 h）表达增高, 而进展至肝衰竭（6 h）后表达下降;荧光显微镜观察发现给予D-GalN/LPS在4 h时间点自噬体的表达最多。结论在D-氨基半乳糖/脂多糖诱导急性肝损伤早中期, 自噬表达逐渐增强, 而进展至肝衰竭后自噬表达下降, 因此细胞自噬可能在急性肝衰竭的发病机制中发挥着重要作用。