肿瘤相关巨噬细胞对Hep3B肝癌细胞上皮间质转化的促进作用及其机制

摘要

目的肝癌细胞的上皮间质转化（EMT）与其恶性行为密切相关。而肿瘤微环境对肿瘤细胞的EMT的调控尤为重要。探明肿瘤相关巨噬细胞（TAM）调控Hep3B肝癌细胞发生EMT的可能机制, 为肝细胞癌（HCC）的临床研究和治疗提供新的方案。方法将人白血病单核细胞系（THP-1）成功诱导为TAM。以TAM为靶细胞, 分别用Hep3B肝癌细胞的上清液以及与Hep3B细胞共培养的形式干预, 用蛋白质印迹法（Western blot）及RT-PCR方法检测TAM的Toll样受体（TLR）4表达变化。用质粒瞬时转染shRNA方法下调TAM的TLR4表达。以Hep3B肝癌细胞为靶细胞, 分别用TAM上清液以及转染了shRNA TLR4质粒的TAM的上清液干预, 用Western blot方法检测Hep3B肝癌细胞的E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白表达。两独立样本均数的比较采用双侧t检验。结果 THP-1细胞被成功诱导为TAM。Western blot结果显示, 与对照组比较, TAM干预组（TAM-CM组）的Hep3B细胞E-cadherin蛋白表达降低、N-cadherin及Vimentin蛋白表达升高。当下调TAM的TLR4表达后, 用其培养液干预Hep3B细胞, 此时, Hep3B细胞的E-Cadherin表达量较TAM-CM组明显增加, 而N-cadherin及Vimentin蛋白表达明显减少。此外, Western blot及RT-PCR结果显示, TAM的TLR4受体表达水平受Hep3B肝癌细胞的影响。TAM组TLR4基因的表达高于TAM+HCC-CM组, t = 6.321, P = 0.003 2, 差异具有统计学意义;TAM+Co-HCC组的表达高于TAM+HCC-CM组, t = 3.189, P = 0.033 2, 差异具有统计学意义。结论 TAM能促进肝癌细胞Hep3B的上皮间质转化。下调TAM的TLR4表达可削弱TAM对Hep3B肝癌细胞上皮间质转化的影响。表明TAM表面的TLR4受体是TAM与Hep3B肝癌细胞相互作用的关键分子。