OGD模型乳小鼠的星状胶质细胞内miR-31对共培养神经元氧化应激损伤的影响

摘要

目的 探究氧-糖剥夺(OGD)模型乳小鼠的星状胶质细胞内miR-31调控PKD1基因表达,进而抑制JAK-STAT3信号通路活化介导的OGD共培养神经元炎症反应以及氧化应激损伤的保护机制.方法 提取乳小鼠原代星状胶质细胞和神经元,流式细胞仪分选纯化,之后将星状胶质细胞分别转染miR-31 mimic、miR-31 inhibitor、si-PKD1或加入JAK-STAT3通路抑制剂;构建OGD模型将转染后的星状胶质细胞与神经元共培养,并分为七组:normal组,blank OGD组,NC OGD组,miR-31 mimic OGD组,miR-31 inhibitor OGD组,si-PKD1 OGD组,si-PKD1+CdCl2 OGD组.MTT法检测OGD共培养体系中神经元存活率;LDH漏出率测定OGD共培养体系中神经元细胞损伤;TUNEL法检测OGD共培养体系中神经元凋亡;免疫荧光法检测OGD共培养体系中氧化应激损伤相关蛋白4-HNE和8-OHdG表达;TBA法检测OGD共培养体系中MDA含量;黄嘌呤氧化酶法检测OGD共培养体系中SOD含量;ELISA检测OGD共培养体系中炎症因子;qRT-PCR检测OGD共培养体系中miR-31和PKD1的表达;Western blot检测OGD共培养体系中PKD1及JAK-STAT3通路相关蛋白表达.结果 OGD模型乳小鼠星状胶质细胞miR-31调控炎症反应结果 显示:与blank组和NC组相比,miR-31 mimic组炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量显著降低(均P0.05);与神经元组(Neuron组)相比,神经元OGD模型组(Neuron OGD组)细胞增殖及存活率减少,培养液中LDH表达增加,细胞凋亡率增加(均P0.05),而PKD1表达和p-STAT3/STAT3显著降低(均P0.05);OGD模型乳小鼠星状胶质细胞miR-31调控PKD1基因抑制OGD导致的神经元氧化应激损伤结果 显示:相比于normal组,blank OGD组LDH和MDA表达量上升,SOD表达下降,神经元膜脂质过氧化损伤标志蛋白4-HNE和DNA氧化损伤标志蛋白8-OHdG免疫染色强度增强,神经元存活率降低,神经元出现氧化应激损伤(均P0.05);采用TUNEL染色及Western blot检测OGD共培养体系中神经元凋亡结果 显示:相比于normal组,blank OGD组神经元细胞凋亡率及凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax表达显著增加(均P0.05).结论 OGD模型乳小鼠星状胶质细胞内miR-31靶向下调PKD1基因,进而通过抑制JAK/STAT3信号通路降低炎症反应,从而减轻OGD神经元氧化应激损伤.